冷凍保存細(xì)胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類(lèi)型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器備。

培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類(lèi)；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

公司優(yōu)勢(shì)：

1.具有多年的銷(xiāo)售經(jīng)驗(yàn)的行業(yè)背景，我司秉承質(zhì)量?jī)?yōu)先的理念，希望廣大科研工作者與我司達(dá)成長(zhǎng)期的合作關(guān)系；

2.公司不僅與各大高校、科研機(jī)構(gòu)以及**性企業(yè)有著合作關(guān)系，還與國(guó)際接軌，我司代理多種知名的國(guó)際品牌，如ATCC、DSMZ、Millipore、Abcam,Serva、Pharmacia、eBioscience,Santa，Abnova，GenWay等。

相關(guān)熱銷(xiāo)產(chǎn)品：

CD146分子(CD146)ELISA試劑盒2-氯-3-甲基吡啶-5-酸 95%2-基硫 96%5'-三磷酸胞苷三鈉鹽

CD134分子(CD134)ELISA試劑盒2-氯吡啶-4-酸 97%乙酸硫噻唑 99%松弛素A(>98%，BR)

CD117分子(CD117)ELISA試劑盒5-氯噻吩-2-酸  97%2-(基硅)苯基三氟磺酸鹽 97%松弛素C(>98%，BR)

CD10分子(CD10)ELISA試劑盒2-氯吡啶-5-酸頻哪酯 98% 茶螺烷 technical, ≥90% (GC,mixture of isomers)松弛素 D(>98%，BR)

CC趨化因子受體7(CCR7)ELISA試劑盒2,6-二氟苯酸 98%二噻吩二硫 97%松弛素E(>98%，BR)

CC趨化因子受體5(CCR5)ELISA試劑盒2,6-二氟吡啶-3-酸 95%季酮酸 96%D-樟腦酸(>99%,BR)

CC趨化因子受體2(CCR2)ELISA試劑盒2,5-二酸  97%乙酸香蘭素酯 98%D(+)-二苯甲酰一水(>98%，BR)

CC趨化因子受體1(CCR1)ELISA試劑盒2,4-二氟苯酸  98%異丁酸香蘭素酯 ≥98%, FG己二烯二(>98%，BR)

CC趨化因子7(CCL7/MCP3/SCYA6/SCYA7)ELISA試劑盒2,5-二氟苯酸 97%香蘭基丁 96%十二烯基丁二酸酐(>98%，BR)

CC趨化因子5(CCL5/D17S136E/SCYA5)ELISA試劑盒2,3-二氯吡啶-4-酸 95%香草酸 98%癸二酸(>96%，BR)

CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白ε(C/EBPε)ELISA試劑盒4-(二甲基氨基)苯酸 95%反式-1,2-環(huán)己二 98%脫氫乙酸(>98%，BR)

CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白δ(C/EBPδ)ELISA試劑盒2,6-二氯吡啶-3-酸 95% 1，2-環(huán)己二 99%脫羰秋水仙堿

CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白α(C/EBPα)ELISA試劑盒2,5-二氯吡啶-3-酸 95%反式-1，2-環(huán)己二四乙酸,一水 99%DON素，嘔吐素；脫氧雪腐鐮刀菌烯(>98%(HPLC),BR)

cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREB)ELISA試劑盒2,5-二氯吡啶-4-酸 95%卡鉑 98%第威德合金

Ca2+激活K+通道蛋白2(KCNN2)ELISA試劑盒2,6-二酸 98%反式-1.2-環(huán)己二四乙酸 98%二乙酰一肟(>98%，BR)

C4結(jié)合蛋白(C4BP)ELISA試劑盒2,4-二甲氧基嘧啶-5-酸 90%順鉑 Pt, 65%二丁基二月桂酸錫(>95%,BR)
大鼠牙髓干細(xì)胞木賊鐮孢

種屬: Fusariumequiseti

分離基物: 花菜籽

**等級(jí): 1

模式菌株: no

應(yīng)用領(lǐng)域: 轉(zhuǎn)化甾體**

培養(yǎng)基: 14,17

生長(zhǎng)條件: 25~28℃

肉桂色曲霉

種屬: Aspergillus│cinnamomeus

提供形式: 斜面培養(yǎng)物

**等級(jí): 1

模式菌株: no

培養(yǎng)基: CM0015

生長(zhǎng)條件: 28℃

存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法