冷凍保存細(xì)胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器備。

培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

公司優(yōu)勢：

1.具有多年的銷售經(jīng)驗(yàn)的行業(yè)背景，我司秉承質(zhì)量優(yōu)先的理念，希望廣大科研工作者與我司達(dá)成長期的合作關(guān)系；

2.公司不僅與各大高校、科研機(jī)構(gòu)以及研發(fā)性企業(yè)有著合作關(guān)系，還與國際接軌，我司代理多種知名的國際品牌，如ATCC、DSMZ、Millipore、Abcam,Serva、Pharmacia、eBioscience,Santa，Abnova，GenWay等。

相關(guān)熱銷產(chǎn)品：

28S抗核糖體抗體(28S rRNP)ELISA試劑盒甲基納迪克酸酐 95%2-羥基-3-萘甲酸  97%硬脂酸鉛

26S蛋白酶體非ATP酶調(diào)節(jié)亞基11(PSMD11)ELISA試劑盒硬脂酸甲酯 CP,45%（GC）水楊酸甲酯 CP,98%硫酸鉛(>99%,BC)

26S蛋白酶體(26S PSM)ELISA試劑盒2-吡啶甲酸 98%水楊酸 AR,99.5%硫酸鉛(>98%,BR)

25羥基維生素D3(25(OH)D3/25 HVD3)ELISA試劑盒二酸鈉 99%水楊酸 CP,99.0%紅色氧化鉛(>95%,BC)

25羥基維生素D3(25 HVD3)ELISA試劑盒錫酸鈉 CP,53.67% SnO2水楊酸 ACS, ≥99.0% 醋酸高鉛(>95%,BC)

25羥基維生素D2(25 HVD2)ELISA試劑盒癸二酸 CP,98.0%水楊酸 Ph. Eur., BP, USP, 99.5-100.5%鉛粉(>99%,BC)

20S蛋白酶體(20SP)ELISA試劑盒磷酸三丁酯 CP水楊酸 用于植物培養(yǎng),≥99 %堿式碳酸鉛(>99%,BR)

2，3-二磷酸甘油酸(2，3-DPG)ELISA試劑盒三鹽酸鹽 98%考馬斯亮藍(lán)G250 AR雷氏曼著色劑

2，3－二磷酸甘油酸(2,3-DPG)ELISA試劑盒酸酯 98%考馬斯亮藍(lán)G250 AR，無蛋白酶來普霉素B 1%溶液

2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)ELISA試劑盒酸三丁酯 >99.0%(T)考馬斯亮藍(lán)G250 70%，用于電泳3,5-二水楊酸鋰(>98%，BC)

2,3Dinor血栓烷B2(2,3-dinor-TXB2)ELISA試劑盒酸三丁酯 CP,98%  ≥98.0% (HPLC)（劇品）無水溴化鋰(>98%,BR)

2 型次核苷酸脫氫酶(IMPDH)(IMPDH2)ELISA試劑盒硫代氨基脲 AR,98.5% Standard for GC, ≥99.5% (GC)氟化鋰

1型1-磷酸鞘氨受體(S1P1)ELISA試劑盒 分析標(biāo)準(zhǔn)品對甲苯磺酰氯 AR，99%偏磷酸鋰(>98%,BR)

17酮皮質(zhì)類固(17-KS)ELISA試劑盒反-氯丹 分析標(biāo)準(zhǔn)品氯T 三水合物 CP,98%草酸鋰(>98%,BR)

17-酮類固(17-KS)ELISA試劑盒二基錫 分析標(biāo)準(zhǔn)品氯T 三水合物 ACS, 98%硬脂酸鋰(>98%,BR)

17羥孕酮(17-OHP)ELISA試劑盒二庚基錫 分析標(biāo)準(zhǔn)品氯T 三水合物 AR,99.0%硫酸鋰一水(分子生物學(xué)級)
兔DC細(xì)胞鏈霉菌

種屬: Streptomyces│sp.

分離基物: 土壤

提供形式: 凍干物

**等級: 1

模式菌株: no

培養(yǎng)基: 0305

生長條件: 28℃

蜂房類芽孢桿菌

種屬: Paenibacillus│alvei

分離基物: 蜜蜂的污仔病

提供形式: 凍干物

**等級: 1

模式菌株: yes

培養(yǎng)基: 348

生長條件: 30℃