實驗材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 

4、培養(yǎng)皿1個，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 

6、細(xì)胞計數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺； 

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價格優(yōu)惠、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務(wù)，同時提供新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關(guān)操作說明。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。 

17羥皮質(zhì)類固(17-OHCS)ELISA試劑盒倍硫磷 分析標(biāo)準(zhǔn)品溴乙酰二甲縮, 含0.2 % 碳酸穩(wěn)定劑, 97%四氟酸鋰(>98%,BR)

17-α-羥化酶(17-α-OH)ELISA試劑盒倍硫磷標(biāo)準(zhǔn)溶液 1.00mg/ml乙酸鎂,四水 AR ,99.0%L-蘇糖酸鈣(>99%,BR)

16α羥基雌酮1(16-α OHE-1)ELISA試劑盒倍硫磷標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=4%硫酸鎂，七水 AR,99.0%L-酪氨酸二鈉鹽(>98%,BC)

15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA試劑盒倍硫磷標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=6%硫酸鎂，七水 用于分子生物學(xué)和植物培養(yǎng)級，≥99.0%魯米諾鈉(>98%,BS)

15-羥基前列腺素脫氫酶(15-PGDH)ELISA試劑盒氣 99%硫酸鎂，七水 GR,99.5%溴-6氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(>98%,BR)

15-epi-氧脂素 A4(15-epi-LXA4)ELISA試劑盒正戊 98%硫酸鎂，七水 SP溴-6氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(>98%,BR)

14-3-3蛋白(14-3-3 pro)ELISA試劑盒二異辛 99%硫酸鎂，七水 99.99% metals basis檸檬酸鎂九水(>98%,BR)

14-3-3 蛋白 beta/alpha(YWHAB)ELISA試劑盒環(huán)戊 99%硫酸鎂，七水 ACS十二烷基硫酸鎂(分子生物學(xué))

12-脂氧化酶/脂加氧酶(LOX-12)ELISA試劑盒二癸 97%溴化鎂（六水） 98%氟化鎂(>98%,BR)

12羥二十烷四烯酸(12-HETE)ELISA試劑盒二正己 99%高氯酸鎂 六水合物 99.99% metals basis氫氧化鎂(>99%,BR)

11去氫血栓烷B2(11-DH-TXB2)ELISA試劑盒癸 98%磷酸氫鎂,三水 AR無水高氯酸鎂(>98%,BC)

11β羥類固脫氫酶1型(11β-HSD1)ELISA試劑盒N,N-二甲基丁  98%葡萄糖酸鎂 USP級硬脂酸鎂

1,5-脫水葡萄糖/1,5-脫水山梨(1,5-AG)ELISA試劑盒二正辛 97%無水硫酸鎂 AR孔雀石綠鹽酸鹽(>90%,BS)

1,4,5-三磷酸肌(IP3)ELISA試劑盒異辛 99%N-芐 97%無水硫酸錳(>98%,BR)

1,3-二磷酸甘油酸(1,3-DPG)ELISA試劑盒正己 99%芐 AR,99.00%硫異煙

1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)ELISA試劑盒辛 99%芐 CP,98.5%硫異煙(標(biāo)準(zhǔn)品)
豬腎上腺髓質(zhì)細(xì)胞大腸埃希氏菌

種屬: Escherichia│coli

提供形式: 凍干物

**等級: 1

模式菌株: no

培養(yǎng)基: 103

生長條件: 37℃

存儲條件: 真空冷凍干燥法

鼠李糖乳桿菌

種屬: Lactobacillus│rhamnosus

提供形式: 凍干物

**等級: 1

模式菌株: no

應(yīng)用領(lǐng)域: 用于益生菌類保健食品**。

培養(yǎng)基: CM0789

生長條件: 37℃
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實驗方案，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計數(shù)器、細(xì)胞計數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。