實驗材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 

4、培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 

6、細胞計數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺； 

公司細胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價格優(yōu)惠、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務(wù)，同時提供新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關(guān)操作說明。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。 

17羥皮質(zhì)類固(17-OHCS)ELISA試劑盒倍硫磷 分析標準品溴乙酰二甲縮, 含0.2 % 碳酸穩(wěn)定劑, 97%四氟酸鋰(>98%,BR)

17-α-羥化酶(17-α-OH)ELISA試劑盒倍硫磷標準溶液 1.00mg/ml乙酸鎂,四水 AR ,99.0%L-蘇糖酸鈣(>99%,BR)

16α羥基雌酮1(16-α OHE-1)ELISA試劑盒倍硫磷標準溶液 100μg/ml,u=4%硫酸鎂，七水 AR,99.0%L-酪氨酸二鈉鹽(>98%,BC)

15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA試劑盒倍硫磷標準溶液 10μg/ml,u=6%硫酸鎂，七水 用于分子生物學(xué)和植物培養(yǎng)級，≥99.0%魯米諾鈉(>98%,BS)

15-羥基前列腺素脫氫酶(15-PGDH)ELISA試劑盒氣 99%硫酸鎂，七水 GR,99.5%溴-6氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(>98%,BR)

15-epi-氧脂素 A4(15-epi-LXA4)ELISA試劑盒正戊 98%硫酸鎂，七水 SP溴-6氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(>98%,BR)

14-3-3蛋白(14-3-3 pro)ELISA試劑盒二異辛 99%硫酸鎂，七水 99.99% metals basis檸檬酸鎂九水(>98%,BR)

示蛋白胨（Proteose Peptone）苦參2-(羥甲基)-1-甲叔丁酯MYOZ/MYOZ1(Myozenin)human、ret、mouse  MYOZ抗原
谷氨鈉 (LP0124)氧化苦參（苦參素）2-(羥甲基)-1-甲叔丁酯CHRNA7(Nicotinic-Acetylcholine receptor alpha 7)  煙型乙酰膽受體α7(多肽)
一號植物蛋白胨 Vegetable Peptone 咖啡2-(羥甲基)-1-甲叔丁酯Nanog fragment  干關(guān)鍵蛋白(多肽)
植物蛋白胨肉湯 Vegetable Peptone Broth硫辛2,4-二甲Natrexone/BSA:Natrexone/KLH  納曲偶聯(lián)牛血清白蛋白：納曲偶聯(lián)血藍蛋白
植物蛋白胨磷鹽肉湯 (VG0200)鹽氨基葡萄糖2,4-二甲NAP1 (nucleosome assembly protein 1)  核體組裝蛋白1（多肽）
大豆蛋白胨（GMO-Free Soya Peptone）羅通定3,4-Difluoro-2-Methylbenzoic AcidN-cadherin  N-鈣粘附分子抗原
Nutrient Agar 營養(yǎng)瓊脂落新婦苷3,4-Difluoro-2-Methylbenzoic AcidE-cadherin  E-鈣粘附分子抗原
Nutrient Agar Tablets 營養(yǎng)瓊脂片劑蘆丁1-叔丁氧羰基-4-乙Nephrin Protein  去氧腎上腺素
麥康凱肉湯 (CM0005)雷公藤甲素1-叔丁氧羰基-4-乙Neurocan  神經(jīng)粘蛋白抗原
麥康凱瓊脂 (CM0007)雷公藤乙素1-叔丁氧羰基-4-乙NF2/merlin(neurofibromatosis type 2)  2型神經(jīng)纖維瘤抗原
蛋白胨水Peptone Water雷公藤紅素Perifosine (KRX-0401)NFATc1  活化T核因子1蛋白
LAB-LEMCO( ) 肉湯 Lab-Lemco Broth雷公藤內(nèi)酯甲1H-苯并咪唑-5-羧phospho-NFKB p65 (pSer536) peptide  磷化核因子/磷化k基因結(jié)合核因子抗原
LAB-LEMCO( ) 瓊脂 Lab-Lemco Agar木犀草素1H-苯并咪唑-5-羧NF-KapBp50(p50 NF-kappa B;p50NFKB)  核因子50/κ基因結(jié)合核因子50抗原
酵母提取物瓊脂(CM0019)木犀草苷1H-苯并咪唑-5-羧NGN3(neurogenin 3; Neurog3)  神經(jīng)元素3抗原
牛奶瓊脂 (CM0021)沒食子3-溴-5-甲氧基苯甲NGX6 (nasopharyngeal carcinoma/NPC associated gene 6)  鼻咽癌相關(guān)基因6（多肽）
巰基醋鹽培養(yǎng)基(Brewer) (CM0023)蒙花苷3-溴-5-甲氧基苯甲NIT2 (nitrilase family, member 2)  NIT2蛋白抗原
改良愛德華培養(yǎng)基(CM0027)莽草1,3,5-三(4 - 羥基苯基)苯NKA(Neurokinin A)  神經(jīng)激肽A抗原
2%亮綠膽汁肉湯(CM0031)芹菜素4-溴-1,3,5-基吡唑NKG2A/CD159a/KLRC1  NK受體2A/自然殺傷活化性受體2A抗原
Kligler 鐵瓊脂 (CM0033)青藤4-溴-1,3,5-基吡唑NKG2D(natural killer cell group 2D)  NK受體/自然殺傷活化性受體
脫氧膽鹽檸檬鹽瓊脂 (CM0035)齊墩果4-溴-1-甲基-1H-吡唑Nm23(NDP Kinase A,NDPKA)  腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因抗原
沙保氏葡萄糖瓊脂 (CM0041)七葉皂苷鈉4-溴-1-甲基-1H-吡唑Nm23-H1 (nucleoside dIPhosphatase kinase A)  腫瘤抑制基因抗原
MRVP 培養(yǎng)基 (Clarks and Lubs 培養(yǎng)基) (CM0043)木糖2,3-二羥基喹喔啉Nogo-B/A  軸索過度生長抑制因子-B/A抗原
瓊脂片劑 (3號瓊脂)(CM0049)鹽育亨賓2,3-二羥基喹喔啉NOS-2 peptide  一氧化氮合成酶-2多肽抗原
尿素瓊脂基礎(chǔ) (Christensen 瓊脂基礎(chǔ)) (CM0053)煙乙(1S,2S)-N,N'-雙[(Ｒ)-2-羥基-2'-苯基-1,1'-聯(lián)萘基-3-基亞甲基]-1,2-二苯基乙二胺合錳(III)Notch1/MOTC(Neurogenic locus notch homolog protein 1)  跨膜受體蛋白Notch-1抗原
血瓊脂基礎(chǔ) (CM0055)金雀花(野靛)N-芴甲氧羰基-O-(芐基磷?；?-L-絲氨NADPH peptide  還原型輔酶Ⅱ抗原
麥芽浸膏肉湯 (CM0057)秋水仙N-芴甲氧羰基-O-(芐基磷酰基)-L-絲氨proCNP/NPPC (pro-natriuretic peptide)  促尿鈉排泄肽前體C抗原
麥芽浸膏瓊脂 (CM0059)薯蕷皂苷元N-芴甲氧羰基-O-(芐基磷?；?-L-絲氨NPY2R(Neuropeptide Y Receptor Type 2)  神經(jīng)肽Y受體2（多肽）
蛋白胨水 (Andrade)薯蕷皂苷二乙烯三胺五甲叉膦NPY1R (neuropeptide Y1 receptor)  神經(jīng)肽Y1受體抗原
Nutirent Broth No.2 2 號營養(yǎng)肉湯原薯蕷皂甙4-氨基-3--5-甲NQO1(NAD(P)H:quinone oxidoreductase l)  醌氧化還原酶抗原
伊紅美蘭瓊脂 (Levine 培養(yǎng)基) (CM0069)蛇床子素4-氨基-3--5-甲NR1/NMDAR1(N-Methyl-d-Asprtate receptor 1)  谷氨受體1（多肽）
西紅柿汁瓊脂 (CM0113)延胡索乙素2--6-甲氧基吡-4-羧OXR (Orexin receptor)  食欲素受體(多肽)
3號麥康凱瓊脂(麥康凱瓊脂(US 配方)) (CM0115)羊藿苷5-基吲哚P2P-R/RBBP6(proliferation potential protein related)  增殖潛能相關(guān)蛋白抗原
大鼠**成纖維細胞碳瓊脂基礎(chǔ) (CM0119)柚皮苷5-基吲哚P19ARF  p19ARF抑癌基因抗原
大鼠**成纖維細胞胰蛋白胨葡萄糖提取物瓊脂 (CM0127)柚皮素5-基吲哚phospho-p38 ERK/MAPK14 (pThr180/pTyr182) peptide  磷化絲裂原活化蛋白激酶p38抗原
Tryptone Soya Broth（Soybean Casein Digest Medium USP）胰蛋白胨大豆肉湯原花青素6-基吲哚MKK3(MAP Kinase Kinase 3)  絲裂原活化蛋白激酶MKK3/6抗原
Tryptone Soya Agar 胰蛋白胨大豆瓊脂現(xiàn)貨巖白菜素6-基吲哚P53(wt-p53)  腫瘤抑制基因抗原（野生型P53）
乳糖肉湯 (CM0137)鹽青藤6-基吲哚Mtp53(Mutant type p53)  突變型P53抗原

培養(yǎng)細胞凍存方案：

以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。

2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞。

3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。

注：離心速度和時間取決于細胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。

6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。