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產品名稱：小鼠肺成纖維細胞
來源：BSL-1

培養(yǎng)基：DMEM高糖90%，胎牛血清10%（1521/1531）

狀態(tài)：成纖維細胞
實驗材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 

4、培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 

6、細胞計數板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺； 

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應含有DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經過優(yōu)，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細胞凍存方案：

以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。

2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞。

3.采用血球計數器、細胞計數儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數儀測定總細胞數和活細胞百分比。根據所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。

注：離心速度和時間取決于細胞種類。

5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調整至該細胞適合的活細胞密度。

6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘撸瑢⒀b有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 

血竭素高酸鹽(標準品)英文名稱： L-Cysteine methyl ester hydrochloride高密度脂蛋白抗體包裝10MG

鴉膽子（標準品）英文名稱： Glycine methyl ester hydrochloride蛋白激酶底物相關蛋白抗體包裝5MG

鴉膽子苦(標準品)英文名稱： L-Glutamic acid dimethyl ester hydrochloride艾滋病病抗體包裝1g

鴉膽子素D(標準品)英文名稱： L-Leucine methyl ester hydrochloride流感病H3N2血凝素抗體包裝250mg

鴨腳樹葉堿（標準品）英文名稱： L-Phenylalanine methyl ester hydrochloride人瘤病16型L2抗體包裝5g

鴨跖草（標準品）英文名稱： L-Proline methyl ester hydrochlorideA型病H7N9 M1蛋白抗體包裝1g

亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯（標準品）英文名稱： L-Serine methyl ester hydrochloride蛭素抗體包裝25g

亞麻木酚素（標準品）英文名稱： L-Tryptophan methyl ester hydrochloride副腫瘤綜合癥小腦變性相關蛋白抗體包裝5g

煙堿(標準品)英文名稱： L-Tyrosine methyl ester 植物熱休克蛋白93抗體包裝25g

延胡索（元胡）（標準品）英文名稱： L-Cysteine ethyl ester hydrochloride重組人瘤病抗體包裝5g

延胡索素（標準品）英文名稱： H-Phe-OEt.HCl長鏈烯脂酰輔酶A脫氫酶抗體包裝25g

延胡索乙素；消旋延胡索乙素(標準品)英文名稱： Glycine ethyl ester hydrochloride羥輔酶A脫氫酶β抗體包裝5g

延齡草苷；地索苷（標準品）英文名稱： L-Methionine ethyl ester hydrochloride三羥基三基輔酶A裂解酶抗體包裝1g

芫花素（標準品）英文名稱： L-Tyrosine ethyl ester hydrochloride 高密度脂蛋白抗體包裝250mg

芫花條（標準品）英文名稱： L-Aspartic acid β-benzyl ester磷酸化三羥基三基輔酶A還原酶抗體包裝1g
B82細胞虎皮粘蓋牛肝菌Human APLN36(Apelin-36) ELISA KitAlias: AP36(Apelin36)ELISAKitReactivity: Human

枯草芽孢桿菌Human MT2A(Metallothionein-2) ELISA KitAlias: MT2(Metallothionein-2)|MT2A|CES1|MT-2|MT-II|Metallothionein-2A|Metallothionein-IIELISAKitReactivity: Human

松針散斑殼Human NRG-1(Neuregulin 1) ELISA KitAlias: NRG-1(Neuregulin1)|Heregulin-1|HGL|HRG1-alpha|HRG1-beta1|NRG1|ARIA|GGF2|GGF|glialgrowthfactor|HGLneudifferentiationfactor|HRG|HRG1|HRGA|neuregulin1typeIVbeta1a|MST131|MSTP131|NDFheregulin|alpha(45kD|ERBB2p185-activator)|neuregulin1|neuregulin1typeIVbeta3|pro-neuregulin-1|membrane-boundisoform|pro-NRG1|sensoryandmotorneuronderivedfactor|SMDFELISAKitReactivity: Human

枯草芽孢桿菌Human TUBB(Tubulin beta chain) ELISA KitAlias: TUBβ(β-Tubulin)|TUBB|OK|SW-cl.56|TUBB5|Tubulinbetachain|Tubulinbeta-5chainELISAKitReactivity: Human

大腸埃希氏菌Human MUCL1(Mucin-like protein 1) ELISA KitAlias: MUCL1(Mucin-likeprotein1)|SBEM|ProteinBS106|SmallbreastepithelialmucinELISAKitReactivity: Human

嚙蝕艾肯氏菌Human CD3E(T-cell surface glycoprotein CD3 epsilon chain) ELISA KitAlias: CD3E(T-cellsurfaceglycoproteinCD3epsilonchain)|CD3e|CD3eantigen|CD3eantigen|epsilonpolypeptide(TiT3complex)|CD3emolecule|epsilon(CD3-TCRcomplex)|CD3-epsilon|T3E|T-cellantigenreceptorcomplex|epsilonsubunitofT3|T-cellsurfaceantigenT3|Leu-4epsilonchain|TCREELISAKitReactivity: Human

星孢鏈霉菌Human ERCC1(DNA excision repair protein ERCC-1) ELISA KitAlias: ERCC1(ExcisionRepairCrossComplementingRodentRepairDeficiencyComplementation1)|DNAexcisionrepairproteinERCC-1ELISAKitReactivity: Human

大腸埃希氏桿菌Human NRP1(Neuropilin-1) ELISA KitAlias: NRP1(Neuropilin1)|BDCA-4|CD304|BDCA4|CD304antigen|neuropilin1|neuropilin-1|NRPNP1|transmembranereceptor|Vascularendothelialcellgrowthfactor165receptor|VEGF165RELISAKitReactivity: Human