商品屬性：
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貨號 |
規(guī)格 |
產(chǎn)品名稱 |
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A-Hc2230-20 μl |
20 μl |
pPIC9K Seamless Cloning Kit（線性化質(zhì)粒） |
儲存條件：
pPIC9K Seamless Cloning Kit（線性化質(zhì)粒）保存條件：-20℃保存
產(chǎn)品介紹：
pPIC9K為畢赤酵母表達載體，載體能夠使用的畢赤酵母宿主菌。 pPIC9載體大小9276 bp，是融合表達載體，利用alpha因子分泌信號肽，分泌表達蛋白基因。在畢赤酵母中利用HIS4進行篩選。在載體構(gòu)建過程中，目的基因必須保證與信號肽的起始密碼子的讀碼框一致。本產(chǎn)品提供pPIC9K經(jīng)EcoRⅠ酶切后的線性化載體，可用無縫克隆技術(shù)將單個或多個DNA片段組裝到載體上。
無縫克隆技術(shù)可在重組酶的作用下，只需一步反應(yīng)，便可將片段克隆到任何載體中的任意位置，得到重組質(zhì)粒。無縫克隆技術(shù)作為一種非常強大的克隆技術(shù)，具有快速、簡便、高效、多片段組裝和定向克隆等特點，用于單個DNA片段的克隆，多個DNA片段組裝克隆以及多位點突變構(gòu)建等實驗?zāi)康摹?
產(chǎn)品特點：
1. pPIC9K為畢赤酵母表達載體，載體能夠使用的畢赤酵母宿主菌。
2. pPIC9載體利用alpha因子分泌信號肽，分泌表達蛋白基因。
3. 在畢赤酵母中利用HIS4進行篩選。
4. 無縫克隆技術(shù)只需要簡單的 PCR 擴增就可以制備片段DNA。
5. 可以克隆長片段和多片段DNA。
操作步驟：
1. pPIC9K線性化載體使用方法：
(1) pPIC9K線性化載體當(dāng)做克隆載體使用，可以在擴增PCR產(chǎn)物的
上游引物 5’端添加序列：GAGAGGCTGAAGCTTACGTAGAATTC
下游引物 5’端添加序列：GCGAATTAATTCGCGGCCGC
通過無縫克隆連接到pPIC9K中。
(2) 測序引物
AOX1-F:GACTGGTTCCAATTGACAAGC或alpha-Factor-F:TACTATTGCCAGCATTGCTGCAOX1-R:GCAAATGGCATTCTGACATCC
(3) pPIC9K線性化載體為 EcoRⅠ酶切后的線性化載體，圖譜及多克隆位點
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