商品屬性：
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貨號 |
規(guī)格 |
產品名稱 |
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A-PJ1047-20KU |
20KU |
Golden MLV Reverse Transcriptase（200U/ul） |
儲存條件：
Golden MLV Reverse Transcriptase（200U/ul）儲存：-20°C 可保存 3 年。
產品介紹：
Golden MLV Reverse Transcriptase 反轉錄 酶是在鼠源病毒反轉錄酶基礎上進行定點突變改良而得。該 酶去除了 RNase H 活性中，從而避免反轉錄過程中降解 RNA。同時經過突變文庫篩選，使得其熱穩(wěn)定性更強，可耐 受 55℃高溫反應（*佳活性溫度為 50℃）。相比于低溫條件 下反轉錄反應，采用高溫反轉錄可顯著打開 RNA 二級結構， 從而提高復雜 RNA 模板的擴增性能、提高反轉錄 cDNA 的 長度和產量，從而提高后續(xù)檢測的靈敏度。
單位定義：以 poly(rA)為模板、oligo(dT)為引物，在 37°C條件下，10 分鐘內催化 1 nmol 的 dTTP 摻入形成酸不溶性沉淀物所需要的酶量，定義為一個活性單位。
酶儲存液：20mM Tris-HCl,pH7.5, 150mM NaCl, 0.1%Tween20, 2mM DTT, 50%甘油。
操作方法：
1. 按以下組分配制反應體系
Golden MLV Reverse Transcriptase 1 μl
10×RT Buffer 2 μl
dNTP Mixture (10 mM each) 1 μl
Total RNA or Poly(A) RNA 0.1-2 μg
20×Oligo dT(25)&Random Primer * 1 μl
RNase Inhibitor (40 U/μl) 0.2 μl
RNase Free H2O Up to 20 μl
*注：Oligo dT(25) 使用濃度為 20~50 μM, 如使用 Random9隨機引物可使用 125 μM，基因特異性引物可使用 5 μM。
2．在 PCR 儀上按下列條件進行反轉錄反應
30°C 5 min
*37-50°C 15~30 min
85°C 5 min
*推薦的反轉錄溫度設置為 50°C，無論是高 GC 或長片段模板，均可獲得綜合性的 cDNA 產量。
3. 反轉錄所得的 cDNA 可直接用于 PCR 反應或儲存于-20°C。
4. 其它注意事項：該酶可與 Taq DNA 聚合酶組合，用于One-Step RT-PCR，推薦的 RT 溫度為 50°C，RT 時間為5min，酶的參考用量為：終反應濃度 0.5-2U/ul。
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