(1)原代細胞的培養(yǎng)方法
原代細胞的培養(yǎng)也叫初代培養(yǎng)是從供體取得組織細胞在體外進行的培養(yǎng)，是建立細胞系的步，是一項基本技術。原代細胞接近和能反映體內(nèi)生長特性，適宜用于敏感性試驗、細胞分化等實驗研究。
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
② 消化培養(yǎng)法
③ 懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
商品屬性：
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組織來源 |
腎臟組織 |
規(guī)格 |
5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
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細胞分類 |
兔原代細胞 |
培養(yǎng)條件 |
氣相：空氣，95%；CO2，5% |
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生長特性 |
貼壁培養(yǎng) |
細胞形態(tài) |
不規(guī)則 含足突細胞 |
細胞簡介：
腎小球為血液過濾器，腎小球壁構成過濾膜。腎小球過濾膜從內(nèi)到外有三層結構：內(nèi)層為內(nèi)皮、中層為腎小球基膜、外層為上皮細胞層，上皮細胞又稱足細胞，其不規(guī)則突起稱足突，其間有許多狹小間隙，血液經(jīng)濾膜過濾后，濾液入腎小球囊。在正常情況下，血液中絕大部分蛋白質不能濾過而保留于血液中，僅小分子物質如尿素、葡萄糖、電解質及某些小分子蛋白能濾過。
腎足細胞即腎小球上皮細胞，它附著于腎小球基底膜的外側，連同腎小球基底膜和腎小球基膜一起構成了腎小球血液濾過屏障。又由于正常成年機體的腎臟足細胞是一種終末分化細胞，體外培養(yǎng)的原代細
細胞特性：
1）細胞來源于實驗動物正常腎臟組織。
2)細胞鑒定：廣譜角蛋白（PCK）或WT-1（Wilm'sTumorProtein）熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細胞生長方式：不規(guī)則，含足突細胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基：
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巨細胞病毒PP65單克隆抗體 HCMV pp65
可溶性附著蛋白β-SNAP抗體 SNAP-beta
造血干細胞特異性相關結合蛋白3抗體 HS1BP3
整合素αV（CD51）抗體 ITGAV
富含亮氨酸重復蛋白8D抗體 LRRC8D
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原代細胞的分離方法：
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，簡單的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。
（一）機械分散法
特點:簡便、快速,但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。
（二）消化分離法
組織消化法是把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。